Objetivo: Analisar o conhecimento da equipe de enfermagem sobre a preservação de vestígios de crime e cadeia de custódia em unidade de saúde referência no acolhimento a vítimas de estupro e realização do aborto legal. Métodos: Estudo transversal, descritivo e exploratório com 35 profissionais, incluindo técnicos de enfermagem e enfermeiros da urgência e do centro cirúrgico. Os dados foram coletados por questionário com variáveis sociodemográficas e variáveis específicas sobre preservação de vestígios e cadeia de custódia conforme processo penal brasileiro, e analisados com IBM SPSS v.25. Resultados: O perfil dos participantes é constituído por sexo feminino (88,6%), técnicos de enfermagem (71,4%), com mais de dez anos de formação (48,81%) e mais de 20 anos de experiencia profissional (45,7%). Os resultados indicaram falta de capacitação adequada para preservação de vestígios, apesar de sua importância ser reconhecida por 80% dos profissionais. Conclusão: Os resultados ressaltam a necessidade de realizar cursos de formação e aperfeiçoamento aos profissionais de enfermagem, especialmente aqueles que prestam assistência diretas às vítimas de crimes sexuais e preservação de vestígios, enfatizando a implementação de protocolos padronizados e a comunicação interdisciplinar.
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